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5XFAD小鼠基因檢測報(bào)告-2016.9.7
動(dòng)物品系： 5XFAD 小鼠 操作日期：2016.9.5-2016.9.7
1.主要試劑
試劑名稱 | 生產(chǎn)廠家 | 備注 |
上游引物oIMR 3610 | Invitrogen | √ |
下游引物oIMR 3611 | Invitrogen | √ |
上游引物oIMR1644 | Invitrogen | √ |
下游引物oIMR 1645 | Invitrogen | √ |
陽性內(nèi)標(biāo)oIMR7338 | Invitrogen | √ |
陽性內(nèi)標(biāo)oIMR7339 | Invitrogen | √ |
TE緩沖液 | Invitrogen | √ |
瓊脂糖 | Invitrogen | √ |
Sybr Safe 染液 | Invitrogen | √ |
TAE緩沖液 | 自制 | √ |
EmeraldAmp PCR Master Mix | TAKARA | √ |
RNase-free水 | GIBCO | √ |
注：實(shí)驗(yàn)中用到的試劑在備注項(xiàng)打“√”，沒有用到的試劑打“—”，與列表不一致的試劑在備注中說明。
2.主要儀器：
儀器名稱 | 生產(chǎn)廠家 | 儀器型號(hào) | 儀器編號(hào) | 備注 |
MINI離心機(jī) | FORCE | SBC140-2 | SB0363 | √ |
漩渦混合儀 | Scientific Industries | G560E | SB0484 | √ |
電子天平 | AL104-IC | 梅特勒托利多 | SB0006 | √ |
PCR儀 | BIO-RAD | Thermal Cycler | SB0407 | √ |
移液器 | Thermo/ Eppendorf/Brand | P10/P100/ P200/P1000 | SB0108/SB0230 SB0608/SB0089 | √ |
注：實(shí)驗(yàn)中用到的儀器在備注項(xiàng)打“√”，沒有用到打“—”，與列表不一致的在備注中說明。
3.PCR操作步驟
試劑 | 體積（μl） |
模板 | 1 |
oIMR3610 | 0.4 |
oIMR3611 | 0.4 |
oIMR1644 | 0.4 |
oIMR1645 | 0.4 |
oIMR7338 | 0.4 |
oIMR7339 | 0.4 |
Master mix (2×) | 10 |
RNase-free水 | 6.6 |
終體積 | 20 |
4. PCR反應(yīng)條件
94 ℃ 3 min；
94 ℃ 30 sec， 54 ℃ 60 sec，72 ℃ 60 sec 35×；
72 ℃ 5 min；
5. 1%瓊脂糖凝膠電泳體系
稱取 1.6 （1.6g）瓊脂糖加入 100 （100ml）TAE緩沖液中混勻，微波爐加熱兩次沸騰后加7μl染液，混勻，倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl樣本，每行*孔加入5μl Marker。進(jìn)行凝膠電泳。
6. 拍圖
完成的凝膠電泳經(jīng)過凝膠成像系統(tǒng)拍圖得出結(jié)果
7. 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
引物名稱 | 序列（5’→3’） | PCR產(chǎn)物大小 |
上游引物oIMR 3610 | AGGACTGACCACTCGACCAG | 377bp |
下游引物oIMR 3611 | CGGGGGTCTAGTTCTGCAT | |
上游引物oIMR1644 | AATAGAGAACGGCAGGAGCA | 608bp |
下游引物oIMR 1645 | GCCATGAGGGCACTAATCAT | |
陽性內(nèi)標(biāo)oIMR7338 | CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT | 324bp |
陽性內(nèi)標(biāo)oIMR7339 | GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC |
8. 結(jié)果判定
根據(jù)成像結(jié)果及判定標(biāo)準(zhǔn)，陽性動(dòng)物編號(hào)如下：共計(jì)16只
8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、
8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596
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